• 產(chǎn)品品牌： REAGEN
• 產(chǎn)品貨號(hào)： RN090FP
• 產(chǎn)品規(guī)格： 50/100T
• 產(chǎn)品適用： 本試劑盒適用于結(jié)核感染的定性檢測，檢測結(jié)果可用于結(jié)核分枝桿菌感染的輔助診斷。
• 產(chǎn)地來源： 深圳
• 保質(zhì)期： 12個(gè)月

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：結(jié)核分枝桿菌核酸檢測試劑盒(熒光PCR法)

【包裝規(guī)格】

100人份/盒

【預(yù)期用途】

本試劑盒適用于檢測痰液樣本中的結(jié)核分枝桿菌（TB）DNA，可用于結(jié)核感染的定性檢測，檢測結(jié)果可用于結(jié)核分枝桿菌感染的輔助診斷。

【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）結(jié)合Taqman技術(shù)，對結(jié)核分枝桿菌（Mycobacterium tuberculosis）的特異性DNA核酸片段進(jìn)行熒光PCR檢測。

【主要成分】

【儲(chǔ)存條件及有效期】

試劑置于-30~-15℃避光保存，有效期為12個(gè)月。本產(chǎn)品反復(fù)凍融應(yīng)不超過5次。

【適用儀器】

熒光定量PCR儀：ABI 7500熒光PCR儀.；ABI Quantstudio5 ；Gentier 96R；SLAN-96P全自動(dòng)醫(yī)用PCR分析系統(tǒng)。

【樣本要求】

1.適用樣本類型：痰液

2.樣本采集

以清晨第一口痰為宜，先用清水漱口，囑咐患者用力咳出深部的痰于無菌保存管，密封，即可送檢。

3.樣本保存與運(yùn)送：

上述采集的樣本可立即用于檢測，或2-8℃保存（不超過24小時(shí)），長期保存請置于-20℃。標(biāo)本運(yùn)送用冰壺加冰或泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。

 【檢驗(yàn)方法】

1. 樣本處理

取待測樣本200ul，按照核酸提取試劑盒說明書進(jìn)行核酸提取。

2. 試劑配置（在準(zhǔn)備區(qū)進(jìn)行，與擴(kuò)增區(qū)分開，冰上操作）

注：試劑使用前要完全解凍，使用前渦旋混勻，10000 rpm離心5 s，確保試劑完全離心至管底，否則會(huì)出現(xiàn)裝量差異的現(xiàn)象。若有N個(gè)待檢測樣本，則需配置N+2擴(kuò)增反應(yīng)（待檢樣本數(shù)N+1個(gè)陽性質(zhì)控品+1個(gè)陰性質(zhì)控品），按下表要求進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)液的配制，配制完成后充分震蕩混勻，10000 rpm離心5 s。按每管20 μl分裝至0.2 ml PCR管中，并做好標(biāo)記，擴(kuò)增反應(yīng)液需現(xiàn)配現(xiàn)用。

3. 加樣（在樣品處理區(qū)進(jìn)行，冰上操作）

按陰性質(zhì)控品、待測樣品、陽性質(zhì)控品的加樣順序，分別取5μL，加入至已分裝擴(kuò)增反應(yīng)液的八聯(lián)管中，反應(yīng)總體系為25μL。蓋緊管蓋，短暫離心后置于熒光定量PCR儀中，并記錄樣本擺放順序。

4. 擴(kuò)增反應(yīng)（在擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行）

選擇FAM通道檢測結(jié)核分枝桿菌核酸，選擇CY5通道檢測內(nèi)標(biāo)。按以下擴(kuò)增程序表設(shè)置PCR擴(kuò)增參數(shù)。

 5.質(zhì)量控制

以上要求需在同一次實(shí)驗(yàn)中同時(shí)滿足，否則，本次實(shí)驗(yàn)無效，需重新進(jìn)行。

6.結(jié)果判讀

反應(yīng)結(jié)束自動(dòng)保存結(jié)果，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié)Baseline 的Start 值、End 值以及Threshold 值（可以根據(jù)實(shí)際情況自行調(diào)整，Start 值可以在3~15、End 值可設(shè)在5~20，調(diào)整陰性對照的擴(kuò)增曲線平直或低于閾值線），點(diǎn)擊Analysis 自動(dòng)獲得分析結(jié)果，在Report 界面觀看結(jié)果。

試驗(yàn)結(jié)果判斷

【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

1．實(shí)驗(yàn)室環(huán)境污染，試劑污染，樣品交叉污染會(huì)出現(xiàn)假陽性結(jié)果，如陰性對照檢測為陽性，則需做進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)來確認(rèn)是哪類污染。如為試劑污染，需開封新的試劑盒再次進(jìn)行實(shí)驗(yàn)；如為樣品交叉污染，應(yīng)重復(fù)實(shí)驗(yàn)；如為實(shí)驗(yàn)室環(huán)境污染，需對實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行徹底清潔或更換實(shí)驗(yàn)室再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

2．試劑運(yùn)輸、保存或配制不當(dāng)會(huì)引起試劑檢測性能下降，出現(xiàn)假陰性結(jié)果。如陽性對照檢測為陰性，應(yīng)開封新的試劑盒再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

【檢測方法的局限性】

1. 該試劑盒僅為定性產(chǎn)品，不做定量測定。

2. 該試劑盒的檢測結(jié)果僅供臨床參考，對患者的臨床診治應(yīng)結(jié)合其癥狀或體征、病史、其它實(shí)驗(yàn)室檢查及治療反應(yīng)等情況綜合考慮。

3. 當(dāng)樣本的細(xì)菌含量低于最低檢出限時(shí)，可能會(huì)出現(xiàn)假陰性。陰性結(jié)果僅說明提取的核酸濃度低于該試劑盒的檢測極限，但不能完全排除細(xì)菌感染的可能。

【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

1.準(zhǔn)確性：企業(yè)陽性參考品檢測結(jié)果全部為陽性，陽性率為15/15。

2.最低檢測限：該試劑盒最低檢測限為500copies/mL。

【注意事項(xiàng)】

1．請嚴(yán)格按照操作步驟操作，試劑配制和加樣等步驟請嚴(yán)格按照說明書要求在冰上操作。

2．試劑配制建議在試劑配制區(qū)進(jìn)行，樣品處理要求在生物安全柜內(nèi)操作。臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)嚴(yán)格按照《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理辦法》等有關(guān)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室、臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的管理規(guī)范執(zhí)行。

3．反應(yīng)液中的成分對光敏感，應(yīng)避光保存。反復(fù)凍融可能降低試劑盒靈敏度，請按檢測頻次將反應(yīng)液以適當(dāng)體積分管保存。

4．反應(yīng)結(jié)束后，擴(kuò)增管請置于密封袋內(nèi)丟棄，當(dāng)日清理，切忌開蓋。

5．不同批號(hào)試劑請勿混合使用，請?jiān)谟行趦?nèi)使用試劑盒。

6. 本品僅用于體外診斷。